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肝素是由交替的己糖醛酸(D-葡萄糖醛酸或L-艾杜糖醛酸)和D-葡糖胺残基组成的天然存在的糖胺聚糖。聚合物被严重硫酸化，在氨基葡萄糖单元的C-2处含有氨基(N-硫酸盐)基团以及各种位置的硫酸酯(O-硫酸盐)基团。肝素从猪肠粘膜分离，分子量分布从5000~30000。肝素琼脂糖是BBI品牌下用于亲和离子交换色谱层析的介质。它能够快速可靠地分离与肝素亲和的生物分子，包括凝血因子，例如ATIII，Factor IX，Factor VII，Factor XI，Factor XII，Xlla以及其他的血浆蛋白，DNA结合蛋白，脂蛋白脂肪酶，脂蛋白(LDL，VLDL，VLDL脱辅基蛋白，和HDL)，作用于核酸的酶(DNA或RNA聚合酶及限制性内切酶等)和类固醇受体(生长激素)，生长因子，如FGF和EGF。肝素琼脂糖较好的流动性和强化学稳定性使其高度适用于生产规模的纯化，并可以方便地包装成1mL肝素琼脂糖预装重力柱(货号：GS4795)，5mL肝素琼脂糖预装重力柱(货号：GS4796)的预装重力柱。

肝素琼脂糖的基质是刚性的6%高度交联的珠状琼脂糖。这种交联的基质已被最优化，具有较好的流动特性，强物理和化学稳定性，而这些特性都是成本效益及大规模使用的关键因素。生产规模的线性流速在1 bar(14.5 psi，0.1 MPa)的压力下通过15cm柱高度时能够很容易到达200~300cm/h。在很多应用中，为了最优化结合条件认为低流速如100~150cm/h是比较好的。肝素通过还原胺化与琼脂糖基质连接，即使在碱性条件下，结合也是稳定的。因此肝素琼脂糖的化学稳定性就仅仅受限于肝素自身配体。由于肝素配体和所使用的垫片之间的定向偶联，该特异性结合活性被增强。

• 平衡缓冲液：0.01M Tris-HCl，pH7.5到8.0，0.15M NaCl
  
  • 如果目标蛋白在Tris缓冲液中不稳定其他缓冲液系统或许可以代替。缓冲液添加是可接受的，有时候蛋白质稳定性至关重要(即巯基乙醇，EDTA)。
    
  • 平衡缓冲液中盐离子的添加可以减少非特异性离子的相互作用。建议使用pH7.5包含0.15M NaCl的10mM Tris-HCl作为平衡缓冲液。然而，如果目的蛋白质通过离子力与肝素结合，则可以使用较低离子强度的缓冲液。
• 洗脱缓冲液：0.01M Tris-HCl，pH7.5～8.0，及1.5M NaCl。
  
  • KCl，CaCl₂，NH4Cl，(NH4)2SO4可以替代缓冲液中的盐。另外也可以使用特殊洗脱剂：离液剂如0.5～6M尿素，胍，硫氰酸钠；0.1～2% TritonX-100；0.1～2%乙二醇或小心使用3.2～10的pH梯度洗脱液。

• 离心：通过离心机去除颗粒，并通过脱脂方法使脂质或脂蛋白含量最小化(这将有助于树脂的清洗和色谱柱寿命的延长)。
  
• 浓缩至在1～10mg/mL之间。通过透析、脱盐柱、渗滤或者稀释法平衡柱子情况。

• 1mL、5mL柱子的总体积分别为10mL和30mL。如果样品体积大于柱子体积，可以进行多次重复应用直到整个样品处理完毕。但注意不要超过柱子的结合能力。
  
• 在工作温度下平衡柱子。室温或4℃下进行纯化。
  
• 取下底盖，取下顶盖，倒出多余的液体，夹住色谱柱并固定在支架上。请让柱子的顶部向上。
  
• 将平衡柱用5～10个树脂体积的靶蛋白的适当缓冲液平衡。使用0.5～1mL/min的流速，使缓冲液从树脂中排出。
  
• 通过用5个柱体积的平衡缓冲液混合蛋白样品进行样品的制备。也可使用其他比例，但需要根据经验确定。
  
• 将蛋白质样品和平衡缓冲液的混合物装入层析柱上。收集流穿液，如果需要，重新应用流穿液过柱以最大化的结合目的蛋白。
  
• 使用2倍柱体积的平衡缓冲液洗涤装载物并收集流穿液。
  
• 继续洗涤去除未结合的蛋白。或许需要洗涤3~10柱体积才能完成游离蛋白的去除，直到280nm处的流穿液部分的吸光度接近基线。
  
• 用两个柱体积的洗脱缓冲液对结合蛋白进行洗脱，重复该步骤两次，每一部分单独用管收集。
  • 有一些蛋白需要很严格的条件进行洗脱，如尝试通过测量280nm处的吸光度或通过BCA蛋白定量检测试剂盒或抗干扰型蛋白浓度测定试剂盒测定洗脱液部分和靶蛋白的流穿液部分。
    
  • 洗脱蛋白可以直接用SDS-PAGE分析。在进行SDS-PAGE分析之前，必须用含有8M尿素的缓冲液对含有盐酸胍的洗脱液进行透析处理。

• 根据样品的性质，肝素琼脂糖介质可通过2～3倍柱体积的高pH(0.1M Tris-HCl，2.0M NaCl，pH8.5)和低pH(0.1M醋酸钠，2.0M NaCl，pH5.0)缓冲液交替洗涤去除离子键结合的蛋白。该循环进行三次后，用至少3倍柱体积的平衡缓冲液来重新平衡柱子。
  
• 另一种琼脂糖再生的方法是用非离子洗涤剂洗涤，去除疏水结合蛋白，例如，在37℃下加入0.1%的TritonX-100，然后用至少3倍柱体积的平衡缓冲液来重新平衡柱子。

• 2倍柱体积的硫酸铵。
  
• 3倍柱体积含有6.0M尿素(或者可用含有6M盐酸胍)pH8.0，1M Tris。
  
• 5倍柱体积的蒸馏水。
  
• 用含有20%乙醇的0.05M的醋酸钠储存层析柱。

• 应根据存在的污染物类型为每个过程设计一个特定的CIP流程。CIP的频率取决于原料的性质和条件，但通常每5个分离循环推荐进行一次CIP清洗。